真菌毒素是真菌在適宜條件下產(chǎn)生的有毒次級(jí)代謝產(chǎn)物,能夠引發(fā)人類、動(dòng)物各種急、慢性疾病。我國(guó)高度重視真菌毒素污染問(wèn)題,GB 2761-2017 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素* 規(guī)定了食品中黃曲meidu素B1、黃曲meidu素M1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的*。據(jù)報(bào)道我國(guó)每年有3100萬(wàn)噸糧食在生產(chǎn)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸過(guò)程中被真菌污染,約占糧食年總產(chǎn)量的6.2%。為了保證我國(guó)糧食質(zhì)量安全,避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失,及時(shí)快速監(jiān)測(cè)真菌毒素污染種類、水平及其風(fēng)險(xiǎn)尤為重要。
由于真菌毒素種類多樣,且存在協(xié)同污染,為確保全面、快速的了解糧食中真菌毒素的污染情況,迫切需要一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏、同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定糧食中多種真菌毒素的方法。目前真菌毒素的前處理檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、免疫親和柱方法等。
基于抗原抗體相互作用的酶聯(lián)免疫吸附法雖有較高的選擇性,但無(wú)法準(zhǔn)確定量,同時(shí)由于前處理簡(jiǎn)單,沒(méi)有有效的凈化,易受基質(zhì)干擾,產(chǎn)生假陽(yáng)性。免疫親和柱前處理凈化方法由于其特異性吸附,凈化效果好,但是一方面操作復(fù)雜,另外一方面成本較高,不適合大規(guī)模檢測(cè)。
給大家分享使用QuEChERS作為前處理凈化的方法,操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,回收率高。采用Accucore aQ HPLC 色譜柱分離,表面多孔增強(qiáng)核技術(shù)的運(yùn)用,兼容100%水相,同時(shí)增強(qiáng)了對(duì)極性化合物的保留及選擇性。采用LC-MS/MS方法,15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析,該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析檢測(cè)。
樣品前處理
1
樣品提取
1
稱取5g均質(zhì)后的樣品放入50mL離心管中,加入10 mL 水,震搖15 min
2
再加入10mL 2%甲酸乙腈,旋渦混合1min
3
加入HyperSep萃取鹽包(P/N 60105-332-B:4g MgSO?,1g NaCl) ,快速震搖1min.
4
≥3000g 離心5min
2
樣品凈化
1
移取1mL上清液到HyperSep凈化管中(P/N:60105-204-B:QuEChERS 2mL 離心管 帶150mg MgSO?, 50mg PSA 50mg C18 ),震搖30s, ≥3000g 離心5min
2
移取500μL凈化液,使用純水稀釋4倍,過(guò)0.2μm濾膜后上機(jī)檢測(cè)
色譜條件
色譜柱 | Accucore aQ, 100 × 2.1 mm, 2.6 μm(P/N 17326-102130) |
柱溫 | 35 ℃ |
進(jìn)樣量 | 10 µL |
流動(dòng)相 | A0.1%甲酸水B0.1% 甲酸乙腈 |
表1.梯度洗脫程序(點(diǎn)擊查看大圖)
質(zhì)譜條件
離子源 | 電噴霧離子源 |
質(zhì)譜掃描方式 | 多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM) |
錐孔電壓 | 3.0kV |
加熱氣溫度 | 500℃ |
離子源溫度 | 150℃ |
脫溶劑氣 | 800L/H |
選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子對(duì)信息見(jiàn)下表 |
表2.化合物及質(zhì)譜采集參數(shù)(點(diǎn)擊查看大圖)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn)品及樣品加標(biāo)譜圖
圖1.12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜(濃度見(jiàn)表3)(點(diǎn)擊查看大圖)
圖2.玉米中12種真菌毒素加標(biāo)圖譜(加標(biāo)濃度見(jiàn)表3)(點(diǎn)擊查看大圖)
采用上述分析方法,12 種真菌毒素在15 min內(nèi)均可獲得良好的色譜峰,圖1為 12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜(濃度見(jiàn)表3),各化合物靈敏度測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表3,LOD在0.1-2ug/kg之間。12 種真菌毒素相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD% 均小于15%(見(jiàn)表3)
表3.12種真菌毒素回收率數(shù)據(jù)及LOD(點(diǎn)擊查看大圖)
結(jié)論
開(kāi)發(fā)了一種快速簡(jiǎn)單的QuEChERS前處理方法用于糧谷中12種典型真菌毒素的分析,使用Accucure aQ表面多孔增強(qiáng)核色譜柱,增強(qiáng)了對(duì)極性化合物的保留及選擇性,峰形良好。采用LC-MS/MS方法,15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析,并獲得較好的回收率,回收率范圍60-110%,LOD為0.1-2 ug/kg,該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析。
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